Vers 1400 le roi Henri III a fait construire un nouveau palais près du Couvent de Sainte-Claire, donnant sur le Douro.
Tordesillas a pris de l'importance. Avec les Trastamaras elle a subi son plus grand essor historique. En 1401 le États généraux sont convoqués à Tordesillas par Henri III le dolent.
En 1419 on a fondé le Couvent des Comendadoras de Saint-Jean par désir de Jean II.
En 1420 la cour du roi Jean II de Castille, père d'Isabelle la Catholique, était à Tordesillas, dans l'ancien palais disparu. Le palais est pris par l'Infant Henri d'Antequera, qui a saisi Jean Hurtado de Mendoza, favori du roi, et lui a séparé du gouvernement. Il a réussi à entrer dans les chambres du roi. Tout cela a été du à l'inimitié et à l'ambition des Infants d'Aragon qui voulaient diriger le royaume de Castille au nom de leur cousin Jean, très jeune encore (15 ans), bien que déjà déclaré majeur (à l'âge de 14).
En 1423 Monsieur Álvaro de Luna est nommé connétable de Castille et des grandes fêtes ont eu lieu en son honneur.
En 1430 Éléonore d'Aragon, la mère des Infants d'Aragon et la belle-mère de Jean II, est saisie et fait reclurer à Sainte-Claire.
En 1434 Jean II a retourné à Tordesillas, et son palais s'est transformé en sa propre prison. L'Infant Ferdinand a séquestré le roi, en répétant un épisode que son propre frère Monsieur Henri avait déjà effectué. Ce même an on a fondé le Couvent des Dominicains.
En 1439 les États généraux de Jean II et des Infants d'Aragonse sont réunis dans une tentative pour établir la paix entre les deux parts, la haute noblesse alliée, dirigée par les Infants d'Aragon et la faction monarchique dirigée par Jean II et le connétable de Castille Álvaro de Luna. Cet événement est connu comme la signature de L'Assurance de Tordesillas sous l'arbitrage du comte de Haro.
Pendant le règne de Jean II, peu après avoir marié sa deuxième conjointe, Isabelle du Portugal, femme de nature jalouse et colérique, celle-ci a ordonné l'emprisonnement de Beatriz de Silva, sa première dame, dans un coffre pendant trois jours. La Vierge est apparue à la dame et lui a commandé la fondation d'un ordre en son honneur, l'Ordre de l'Immaculée Conception. Elle a été canonisée en 1976 par le Pape Paul VI.
En 1451 Jean II et son fils l'Infant Henri, futur Henri IV l'Impotent, se sont réunis à Sainte-Claire pour essayer d'obtenir une entente cassée parce qu'ils étaient dans des factions opposées.
En 1453 l'Infant Alphonse, fils de Jean II et Isabelle du Portugal, est né à Tordesillas. Il serait nommé postérieurement héritier au Trône castillan par son demi-frère Henri IV.
En 1465 Henri IV a accordé des privilèges à Tordesillas, comme le marché ouvert. Il a indiqué le mardi comme le jour où ce marché devait avoir lieu, coutume qui tien encore.
En 1467 on a fondé l'hôpital de Mater Dei, merci à la donation faite par Madame Beatriz, fille de Monsieur Dionis du Portugal.
En 1468 l'Accord des Taureaux de Guisando a donné à Isabelle la Catholique la reconnaissance comme héritière au trône de son frère le roi, pressé par la noblesse qui assurait que Jeanne, la seule fille de Henri IV, était une fille bâtarde de Beltrán de la Cueva, l'homme de confiance du roi. Toutefois Isabelle a dû se marier avec lui.
En 1474 Henri IV est mort. Ça a provoqué une guerre civile entre les partisans de Jeanne la Beltraneja, appuyée par son mari Alphonse V du Portugal et les partisans d'Isabelle la Catholique, soutenue par son mari. Ferdinand le Catholique a été appelé par la ville de Tordesillas, parce que le gouverneur de Castronuño, qui appuyait à Jeanne, avait pris la ville et s'était adonné au pillage. Il s'était retranché à l'hôpital de Mater Dei (dont la fondatrice était portugaise) et prennait l'argent et le grain des paysans. Tordesillas fut postérieurement libérée et prise comme quartier général des troupes des rois Catholiques. D'ici les troupes sont sorties dirigées par Ferdinand le Catholique pour la bataille de Toro (1476), dont la victoire était décisive pour le cours de la guerre.
En 1479 on a signé le Traité d'Alcaçovas, traité de paix entre les couronnes castillanne et portugaise par lequel on a recluré Jeanne dans un couvent de Coïmbre, et on a décidé le mariage entre l'aînée des rois Catholiques et l'Infant Alphonse du Portugal. Dans ce traité, les deux couronnes ont distribué l'Océan Atlantique. Ce serait par conséquent le précédent du Traité de Tordesillas.
En 1485 l'Évêque de Ségovie, Juan Arias Dávila, a commandé la construction d'une place publique selon le rang de la ville et d'un Hôtel de Ville, ce qui a donné lieu au tracé de l'actuelle Grand-place.
En 1494 a eu lieu un des événements les plus importants dans l'histoire de Tordesillas, la signature du Traité le 7 juin 1494, par lequel les couronnes castillanne et portugaise ont reparti les droits de navigation et de conquête de l'Atlantique.
En 1499 on a fondé l'Hôpital de Pèlerins, merci à la cession faite dans son testament par Monsieur Juan González, archiprêtre de la ville.
